RT-PCR試劑盒使用注意事項
瀏覽次數:765發(fā)布日期:2021-12-13
RT-PCR試劑盒逆轉錄和PCR在同一反應體系中進(jìn)行,反應過(guò)程中無(wú)需添加試劑,無(wú)需打開(kāi)管蓋,在避免污染的同時(shí)提高了檢測靈敏度和實(shí)驗效率。本試劑盒包括全新高效逆轉錄酶、快速熱啟動(dòng)DNA聚合酶,同時(shí)包含適用于逆轉錄和PCR擴增的反應緩沖液和實(shí)驗中所需的反應組分。經(jīng)過(guò)重組表達的SuperRT逆轉錄酶RNaseH活性缺失,減少了逆轉錄反應中RNA的降解,更容易獲得全長(cháng)的cDNA。
該逆轉酶逆轉錄效率高,可對少量RNA模板進(jìn)行良好的逆轉錄反應。SuperRT逆轉錄酶與RNA親合性高,能通讀GC含量高,二級結構復雜的RNA模板,獲得高產(chǎn)量的cDNA。PCR反應使用的DNA聚合酶具有擴增效率高、延伸速度快的優(yōu)良性能。*的緩沖體系使逆轉錄酶和聚合酶同時(shí)發(fā)揮功效。使用該試劑盒能夠方便快捷的在同一個(gè)反應管內完成逆轉錄和PCR擴增反應。使用本試劑盒擴增得到的目的產(chǎn)物3′端附有一個(gè)″A″堿基,可直接用于T/A克隆。
RT-PCR試劑盒注意事項:
1.用于cDNA合成反應的溶液試劑盡量可能用DEPC進(jìn)行處理,并在高壓滅菌后使用。有些試劑不能高壓滅菌時(shí),首先用經(jīng)過(guò)滅菌的器具、水等配制溶液后,再將溶液進(jìn)行過(guò)濾除菌處理。
2.RNA樣品要避免基因組DNA污染。
3.避免多次反復凍融RNA,使RNA保持在冰浴中處融化狀態(tài)。
4.試劑盒的各組成成分應在-20℃保存。
5.cDNA產(chǎn)物應置于-20℃保存。
RT-PCR試劑盒合理配備了與cDNA鏈合成反應相關(guān)的各種組分,該試劑盒中的TIANScriptM-MLV具有高效的逆轉錄酶活性,對后續的PCR或定量PCR實(shí)驗兼容性好,適合于各種PCR耐熱聚合酶。