人成熟促進(jìn)因子(MPF)免疫組化試劑盒實(shí)驗步驟:
1.烤片: 將待做切片置于切片架上,于60℃恒溫烤箱中至少烤1 hr;
2.脫蠟: 切片放入盛有二甲苯的容器中脫蠟3 次(即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ),每次10 min;
3.水化: 切片經(jīng)下行酒精水化,無(wú)水乙醇5min,95%乙醇2 次(每次2min),85%乙醇2 min;75%乙醇2min,自來(lái)水沖洗,ddH2O 洗2×2min;
4.抗原修復: 根據抗體說(shuō)明書(shū)推薦方法進(jìn)行抗原修復,常采用高壓、微波(溫
度達到98~100℃)或酶消化修復法,室溫自然冷卻,自來(lái)水沖洗,ddH2O 洗2×2min,TBS 洗滌(2×2min)(具體修復方法見(jiàn)附1)* 注:有些抗原勿需修復,直接進(jìn)入第5 步封閉。
5.封閉: 滴加試劑B,37℃濕盒孵育30 min;
6.加一抗:滴加用試劑C(即用型一抗),37℃濕盒孵育2 hr 或4℃過(guò)夜;
7.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min);
8.封閉: 滴加試劑B,37℃濕盒孵育10 min;
9.加二抗: 滴加用抗體稀釋液稀釋的生物素化二抗(試劑D),37℃濕盒中孵育30 min;
10.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min);
11.封閉: 滴加試劑Tween 20,37℃濕盒孵育封閉20 min;
12.加HRP-SA: 滴加用抗體稀釋液稀釋的試劑E(1:50~200,終濃度5~20 nM),
37℃濕盒中孵育30 min;
13.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min),TBS 洗滌(2×5 min);
14.顯色:應用DAB 溶液(試劑F)顯色;
15.復染:自來(lái)水充分沖洗,復染,脫水,透明;
16.封片: 待組織標本干后,用試劑緩沖甘油封固劑封片;
17.觀(guān)察成像: 顯微鏡下觀(guān)察成像。
磷酸化APP淀粉樣肽前體蛋白抗體
磷酸化活化復制因子2抗體
磷酸化活化復制因子2抗體
磷酸化細胞周期末期促進(jìn)復合蛋白APC1抗體
發(fā)育分化增強因子1抗體
磷酸化發(fā)育分化增強因子1抗體
蛋白激酶B3
肌動(dòng)蛋白結合蛋白Girdin抗體
蛋白激酶A2抗體
血管緊張素Ⅱ受體2抗體
ASH1蛋白抗體
芳香乙酰胺脫乙?;笜拥鞍?抗體
血管內皮細胞遷移蛋白抗體
醛糖還原酶相關(guān)蛋白質(zhì)抗體
膽汁酸結合蛋白DDH2抗體
血管生成素樣蛋白3抗體
甘油酯激酶線(xiàn)粒體抗體
磷酸化內收蛋白a1抗體
自噬體ATG16L2蛋白抗體
酸性磷酸酶抗體
酸性磷酸酶抗體
極光激酶A相互作用蛋白1抗體
載脂蛋白樣蛋白6抗體
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