PCR擴增試劑盒實(shí)驗時(shí)的幾大事項說(shuō)明
瀏覽次數：969發(fā)布日期：2020-10-21
PCR擴增試劑盒提供DNA擴增所需要的基本試劑。DNA擴增時(shí)，用戶(hù)需要自行準備模板和擴增所需要的引物。高溫嗜熱Pfu DNA聚合酶主要用于對保真度要求非常高的DNA擴增，這些擴增要求擴增的產(chǎn)物中不能出現突變等錯誤。
PCR擴增試劑盒實(shí)驗事項：
1.樣本上PCR平臺可做的樣本包括血液，唾液，口腔拭子，在實(shí)驗中，對于DNA投入量要求不是很高，根據不同項目需求，DNA投入量的范圍在100pg到100ng之間。
2.進(jìn)行PCR反應前，可以將所有g(shù)DNA的濃度稀釋到同一濃度，并轉移到PCR8聯(lián)管中，一方面是便于排槍操作，另一方面是加入相同起始量的gDNA，這樣可以降低終文庫的濃度差異，便于混合文庫。
3.大多數情況下引物是1管，操作相當方便；當目標區域是外顯子或者是其他連續區域時(shí)，把引物分裝為2管，需要第二輪PCR前把產(chǎn)物合并，再進(jìn)行下一步反應。
4.執行多重PCR反應時(shí)，特別是樣本量多的情況下，可以將T1設為一組，T2設為一組，便于制備反應試劑混合液和排槍操作；并把解凍好的試劑放置在冰盒上，在冰盒上進(jìn)行加樣操作。
5.實(shí)驗中，可以在PCR管壁上和管蓋上同時(shí)進(jìn)行反應編號標記，防止高溫或其他原因導致記號消失，避免后續產(chǎn)物混合操作失誤，造成樣本交叉污染。
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